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      一體式超聲波破碎儀對大腸桿菌實驗的幫助

      更新時間:2021-11-19瀏覽:1284次
         一體式超聲波破碎儀用于多種動植物、病毒、細胞、細菌及組織的破碎,同時可用來乳化、分離、勻化、提取、消泡、清晰、納米材料的制備、分散及加速化學反應等。該設備被廣泛用于生物學、微生物學、物理學、動物學、農學、制藥、化工、污水處理、納米材料等領域,也可用于產生波提取、超聲波材料制備、超聲波萃取、超聲波乳化等。
        破碎大腸桿菌用于提取表達外源蛋白,在使用一體式超聲波破碎儀之前,用PBS懸浮,然后再破碎效果較好,其作用還是很明顯的,對其他的一些細菌同樣起作用,比如鏈霉菌。
        細菌沉淀直接加樣品1 buffer,再加5μl的巰基乙醇,混勻,離心,煮沸10min,直接上樣,染色脫色步驟:
        將膠放入適量的染色液微波爐里加熱1min(下次適當補點醋酸即可),將染色液換成大量的水(自來水即可)在微波爐煮10min就可以。在表達重組蛋白后用超聲波破碎細胞,采用冰浴,400w,破2s停1s,但是不一會就產生大量泡沫,影響了破碎功率,pbs和tris緩沖液都是這樣,最后都是破碎不*,而蛋白就在這些未破碎的細胞中。
        相關問題探討:
        1.試驗中產生氣泡:因為探頭位置沒放好。超聲波破碎儀探頭一定要接近底部約1cm。功率根據儀器不同會有所不同,但可通過觀察液面,有波動但不要太劇烈就好。
        2.破3s停10s,破碎20-30個循環觀察效果。
        3.探頭位置擺放要注意,聽聲音如果不對的話就要及時調整。另外可從菌濃度方面考慮。在使用超聲波破碎時試著加大體積,振幅最好不要超過60%。
        4.嘗試超8s停8s,對有些菌體蛋白來說,通常方法很難散熱,導致蛋白變性產生氣泡,可停頓時間稍長一些,這種情況多見于包涵體形式的蛋白。如果換用一體式超聲波破碎儀來進行工作,由于熱耗較小,停頓周期可適當減小。
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